分子克隆实验指南第4版（上中下册合集） J.萨姆布鲁克、M.R.格林著 贺福初译
分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。
目录
《分子克隆实验指南·上册》目录：
第1章DNA的分离及定量
导言
方案1SDS碱裂解法制备质粒DNA：少量制备
方案2SDS碱裂解法制备质粒DNA：大量制备
方案3从革兰氏阴性菌（如E.coli）中分离DNA
方案4乙醇法沉淀DNA
方案5异丙醇法沉淀DNA
方案6用微量浓缩机进行核酸的浓缩和脱盐
方案7丁醇抽提法浓缩核酸
方案8聚乙二醇沉淀法制备M13噬菌体单链DNA
方案9M13噬菌体铺平板
方案10M13噬菌体液体培养
方案11M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备
方案12利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA
方案13用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
方案14一步法同时提取细胞或组织中的DNA、RNA和蛋白质
方案15从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA
替代方案：不使用有机溶剂从鼠尾分离DNA
替代方案：一管法从鼠尾中分离DNA
方案16快速分离酵母DNA
方案17微型凝胶电泳后使用溴化乙锭（EB）估算条带中DNA数量
方案18利用Hoechst33258通过荧光分析仪估算DNA浓度
方案19用PicoGreen定量溶液中的DNA
信息栏
第2章DNA分析
导言
方案1琼脂糖凝胶电泳
方案2琼脂糖凝胶中DNA的染色检测
方案3聚丙烯酰胺凝胶电泳
方案4聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测
方案5聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测
方案6碱性琼脂糖凝胶电泳
附加方案：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影
方案7成像：放射自显影和感光成像
方案8用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA
方案9低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收：有机溶剂抽提法
方案10聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收：压碎与浸泡法
方案11Southern印迹
方案12Southcm印迹：DNA从一块琼脂糖凝胶同时向两张膜转移
方案13采用放射性标记探针对固定在膜上的核酸DNA进行Southern杂交
附加方案：从膜上洗脱探针
信息栏
第3章质粒载体克隆与转化
导言
方案1制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法：高效转化策略
方案2制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法：“超级感受态”细胞
方案3大肠杆菌的简单转化：纳米颗粒介导的转化
替代方案：一步法制备感受态大肠杆菌：在同一溶液中转化和储存细菌细胞
方案4电穿孔法转化大肠杆菌
方案5质粒载体克隆：定向克隆
方案6质粒载体克隆：平末端克隆
方案7质粒DNA的去磷酸化
方案8向平末端DNA添加磷酸化衔接子／接头
方案9克隆PCR产物：向扩增DNA的末端添加限制性酶切位点
方案10克隆PCR产物：平末端克隆
方案11克隆PCR产物：制备T载体
方案12克隆PCR产物：TA克隆
方案13克隆PCR产物：TOPOTA克隆
方案14使用X—Gal和IPTG筛选细菌菌落：α—互补
信息栏
第4章Gateway重组克隆
导言
方案1扩增Gateway载体
方案2制备可读框入门克隆和目的克隆
方案3应用多位点LR克隆反应制备目的克隆
信息栏
第5章细菌人工染色体及其他高容量载体的应用
导言
方案1BAC DNA的小量分离和PCR检验
方案2BAC DNA的大量制备和线性化
方案3通过脉冲电场凝胶电泳检验BAC DNA的质量和数量
方案4两步BAC工程：穿梭载体DNA的制各
方案5A同源臂（A—Box）和B同源臂（B—Box）的制备
方案6克隆A和B同源臂到穿梭载体
方案7重组穿梭载体的制备和检验
方案8通过电穿孔法转化重组穿梭载体到感受态BAC宿主细胞
方案9共合体的检验和重组BAC克隆的筛选
方案10一步BAC修饰：质粒制备
方案11A同源臂（A—Box）的制备
方案12克隆A同源臂到报道穿梭载体
方案13用RecA载体转化BAC宿主
方案14转移报道载体到BAC／RecA细胞以及共合体的筛选
方案15酿酒酵母（S.cerevisiae）的生长和DNA制备
方案16酵母DNA的小量制备
信息栏
第6章真核细胞RNA的提取、纯化和分析
导言
方案1从哺乳动物的细胞和组织中提取总RNA
替代方案从小量样本提取RNA
方案2从斑马鱼胚胎和成体中提取总RNA
方案3从黑腹果蝇提取总RNA
方案4从秀丽隐杆线虫中提取总RNA
方案5从酿酒酵母菌中采用热酸酚提取总RNA
方案6RNA定量和储存
方案7RNA的乙醇沉淀
方案8通过无RNase的DNaseI处理去除RNA样品中的DNA污染
方案9Oligo（dT）磁珠法提取poly（A）+mRNA
方案10按照大小分离RNA：含甲醛的琼脂糖凝胶电泳
方案11根据分子质量大小分离RNA：RNA的尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
方案12琼脂糖凝胶中变性RNA的转膜和固定
替代方案下行毛细管转移
方案13聚丙烯酰胺凝胶的电转移和膜固定
方案14Northern杂交
方案15纯化RNA的点杂交和狭缝杂交
方案16用核酸酶S1对RNA作图
方案17核糖核酸酶保护分析：用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图
方案18引物延伸法分析RNA
信息栏
第7章聚合酶链反应
导言
方案1基础PCR
方案2热启动PCR
方案3降落PCR
方案4高GC含量模板的PCR扩增
方案5长片段高保真PCR（LAPCR）
方案6反向PCR
方案7巢式PCR
方案8mRNA反转录产物cDNA的扩增：两步法RT—PCR
方案9由mRNA的5’端进行序列的快速扩增：5’—RACE
方案10由mRNA的3’端进行序列的快速扩增：3’—RACE
方案11使用PCR筛选克隆
信息栏
第8章生物信息学
导言
方案1使用UCSC基因组浏览器将基因组注释可视化
方案2使用BLAST和ClustaIW进行序列比对和同源性检索
方案3使用Primer3Plus设计PCR引物
方案4使用微阵列和RNA—seq进行表达序列谱分析
方案5将上亿短读段定位至参考基因组上
方案6识别ChIP—seq数据集中富集的区域（寻峰）
方案7发现顺式调控基序
信息栏
……
《分子克隆实验指南·中册》
《分子克隆实验指南·下册》
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