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xygg   发表于 2017-8-28 21:18:03 |栏目:仪器资料
  • 资料类型 :五花八门 
  • 资源级别: 三星以上
  • 文件类型 : txt 
  • 适合人群 : 初学者
  • 关联厂家 :
  • 仪器型号:
HPLC专家解答精华集
biosepq 问:反相C8基线问题。
我使用的是Agilent Zorbax C8柱(4.6x150mm),想在1100上进行一个蛋白的分析。样品是自己纯化的,SDS-PAGE纯度为90%以上,总蛋白浓度1mg/ml。
流动相为:0.1% TFA in water  0.1% TFA in ACN
梯度:5~95%B, 50min;100% B 10min
(water为18.2M欧,ACN为 J T baker,HPLC级,1100带自动在线脱气,自动进样器)
进了两次样,第一次50vl,第二次100vl。

然后进空白样(water),发现基线不稳,而且在固定的B浓度处会有峰洗出。重复进空白样也是如此,杂峰的位置和面积几乎没有变化,重复性很好。开始怀疑是流动相的问题,换为新鲜超纯水和新的ACN,不加TFA,平衡柱子后,重复作上述线性梯度,依然有大量杂峰。
用100% ACN洗柱 1hr,基线可以走得很平;5% B平衡,也可以走平
但重复走梯度,仍然基线在50~90%处有大量杂峰(如图)。
整个过程中,未见有明显压力增加。
请问,这是什么缘故阿?到底是什么东西一直出峰阿,是不是有蛋白沉淀在柱头了呢?谢谢了

你用100% ACN洗柱 1hr,基线可以走得很平;5% B平衡,也可以走平,这是因为你不是走梯度,不存在柱平衡问题。走梯度,基线自然相对不稳。请你
把走梯度测样品的色谱图附上给我,一看究竟,作对比。匆此。后谈。

yjyanjun wrote:
专家:
您好!
我现在在做一个有机盐的药代动力学,卡在HPLC色谱条件上。我采用了梯度洗脱的方法,血清去蛋白后直接进样检测该药物,有一杂峰干扰。我曾经得到了比较好的分离结果,可是去无法重复。而且该药的峰比较宽,是不是由于不纯所致?
另外,由于该化合物在酸性和中性环境下容易转化为其代谢产物,所以我们碱化流动相,化合物的峰变得锐利,可是这是以牺牲柱子的寿命为代价的,效果并不理想。
请问,对于这种极不稳定的盐,我还有什么高招?我可不可以考虑使用耐碱的柱子并且前面加上饱和柱,可是这样就一定能解决问题吗?请您指正,谢谢!
HPLC专家解答:
不知该有机盐什么结构或名称,难于对症下药。
请你发“三有”或“五有”电邮给我后,我认真分析后再作答复
……
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killer--king

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killer--king   发表于 2017-9-22 17:09:28 |栏目:仪器资料
我帶著醬油瓶路過一起下吧的,還是忍不住小手一抖!

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shenmeren

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shenmeren   发表于 2017-10-18 09:38:25 |栏目:仪器资料
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kentck

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kentck   发表于 2017-11-10 01:03:44 |栏目:仪器资料
这个資源一般般,不過我喜歡

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wh78340905

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wh78340905   发表于 2017-11-30 03:22:23 |栏目:仪器资料
啥也不说了,感谢一起下吧和楼主的分享哇!

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hungrywolf

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hungrywolf   发表于 2018-8-14 04:03:11 |栏目:仪器资料
么有分,谁能送我点搬砖数值啊::>_<::

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liu5512418

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liu5512418   发表于 2018-10-3 06:36:48 |栏目:仪器资料
确实是难得好帖啊,讓我涕流滿面,頂頂一起下吧先

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gaodonglai

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gaodonglai   发表于 2018-11-23 08:33:27 |栏目:仪器资料
這麼好的帖子都沒有人頂!d=====( ̄▽ ̄*)b,我來多頂頂樓主

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喵喵

氦级

喵喵   发表于 2019-1-15 03:53:54 |栏目:仪器资料
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Snoopy

等待验证会员

Snoopy   发表于 2019-3-14 15:52:48 |栏目:仪器资料
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