沃特世2695-2489HPLC 系统操作规程

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沃特世2695-2489HPLC 系统操作规程 新色谱柱的安装和平衡 使用新色谱柱前需要对色谱柱进行润湿和平衡,注意确保您所使用的流动相和色谱柱储存溶剂“相溶”。Symmetry/Sunfire反相色谱柱是在100%乙腈中储存的。 a)依次用水和乙腈(或甲醇)冲洗液相色谱泵系统中含有 缓冲盐的流路,然后将色谱柱按照标签上的箭头方向`` 连接到进样器或保护柱的出口端,标签上的箭头指向 检测器流向(先不要接检测器)。 b)在0.1ml/min流速条件下用100%纯甲醇或乙腈冲洗色谱 柱,然后在5分钟内将流速升至1 ml/min。 c)当溶液均匀地从柱子出口流出时,停掉流速,将色谱柱 出口端接到检测器上(这样操作可以避免气泡进入检 测系统,并且可快速达到基线平衡)。 d)按照步骤b)的方法逐渐提高流速。 e)当压力达到稳定值并且基线平稳后,缓慢降低流速,停泵。 f)用5:95乙腈:水(体积比)冲洗色谱柱30分钟(注意流速 要从0.1 ml/min缓慢上升至1 ml/min)。 g)换上含有离子对试剂的流动相,对色谱柱进行平衡,直 到基线平稳 。 h)进标准溶液和样品溶液进行分析。 色谱柱的再生 n 保留时间漂移或者分离度发生变化往往说明色谱柱被污染了,用纯有机溶剂(乙腈或甲醇)冲洗色谱柱通常可以洗去污染物。 n 根据样品的干净程度定期更换保护柱,压力逐渐增加或者出现分叉峰往往表明需要更换保护柱了。如果保护柱更换后问题依然存在,说明色谱柱被强吸附的污染物堵塞,这时需要选择合适的溶剂来溶解这些污染物,比如,变性蛋白可以通过反复几次进200μl DMSO来清洗。 n 如果上述方法还是不能解决问题,可以换用一系列疏水性逐渐增强的溶剂来清洗色谱柱。更换溶剂的顺序可以为:水-四氢呋喃-二氯甲烷-四氢呋喃-水。 evsj|2[/pan]

阅读:1302 | 评论:13网友评论:

  • qihan 发表于 2019-9-27 11:24:24
    确实是难得好帖啊,讓我涕流滿面,頂頂一起下吧仪器资料先
  • 羽帆 发表于 2019-4-27 17:27:10
    啥也不说了,感谢一起下吧和楼主的分享哇!
  • hzqydq 发表于 2019-3-3 17:07:02
    這麼好的帖子都沒有人頂!d=====( ̄▽ ̄*)b,我來多頂頂樓主
  • glxxx 发表于 2019-1-5 19:21:59
    确实是难得好帖啊,讓我涕流滿面,頂頂一起下吧先

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