动物细胞培养基本技术和特殊应用指南 (原书第六版) R.I.Freshney 著
《动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南》历来被看作该领域的经典与领衔工作。本版除保留前五版的基本内容（如原代培养、细胞系、传代、分化、细胞特化、污染、无菌技术、细胞毒性、冷冻保存、实验室布局与设备培训纲要等）之外，为反映组织工程与再生医学发展的需要，特地增加了“干细胞”一章，以及某些新的特殊技术。内容新颖，程序可靠。极具参考与模仿价值。
译者的话
前言与致谢
缩略语
图片目录
彩版目录
方案目录
第1章绪论1
1.1历史背景1
1.2组织培养的优点7
1.2.1环境控制7
1.2.2样品的特征和均一性8
1.2.3经济、规模和机械化8
1.2.4体内环境的体外模拟8
1.3局限性9
1.3.1专业技能9
1.3.2量的问题9
1.3.3去分化和选择10
1.3.4细胞的起源10
1.3.5不稳定性10
1.4体外的主要差异10
1.5组织培养的类型11
第2章培养细胞的生物学14
2.1培养细胞的环境14
2.2细胞黏附14
2.2.1细胞黏附分子15
2.2.2细胞间连接16
2.2.3细胞外基质16
2.2.4细胞骨架18
2.2.5细胞迁移18
2.3细胞增殖18
2.3.1细胞周期18
2.3.2细胞增殖的调控19
2.4细胞分化20
2.4.1细胞分化的维持21
2.4.2细胞去分化21
2.5细胞信号传递24
2.6能量代谢25
2.7培养细胞的起源26
2.7.1培养的开始26
2.7.2细胞系的演化27
2.7.3细胞的衰老28
2.7.4连续细胞系的转化与形成28
第3章实验室设计、布局及设备30
3.1布局、规划和服务设施30
3.1.1要求32
3.1.2服务设施34
3.1.3通风装置35
3.2布局35
3.2.1无菌操作区36
3.2.2层流原理36
3.2.3工作台36
3.2.4检疫室和防范室36
3.2.5培养37
3.2.6准备区40
3.2.7储存41
第4章设备及材料44
4.1组织培养实验室的要求44
4.2无菌区46
4.2.1洁净台46
4.2.2手推车48
4.2.3无菌液操作——移液和分装49
4.2.4倒置显微镜53
4.2.5CCD摄像机和监视器54
4.2.6解剖显微镜54
4.2.7离心机54
4.2.8细胞计数55
4.3细胞孵育和培养55
4.3.1恒温箱55
4.3.2湿式CO2培养箱56
4.3.3温度记录仪57
4.3.4滚动架57
4.3.5磁力搅拌器58
4.3.6培养器皿58
4.4实验准备和杀菌58
4.4.1清洗58
4.4.2培养基和试剂的制备59
4.4.3杀菌61
4.5储存63
4.5.1消耗品63
4.5.2冰箱和冷冻箱63
4.5.3冷藏器64
4.5.4可控速率冷冻箱64
4.6附属设备64
4.6.1计算机和网络64
4.6.2普通正置显微镜65
4.6.3低温冷冻箱65
4.6.4共聚焦显微镜65
4.6.5PCR循环仪65
4.7专用设备66
4.7.1显微注射装置66
4.7.2集落计数器66
4.7.3可离心淘洗机66
4.7.4流式细胞仪66
第5章无菌技术67
5.1无菌技术的目标67
5.1.1微生物污染的风险67
5.1.2无菌的维持67
5.2创造无菌环境的各种因素68
5.2.1层流69
5.2.2安静的工作区域71
5.2.3工作面71
5.2.4个人卫生73
5.2.5试剂和培养基73
5.2.6培养物73
5.3灭菌操作73
5.3.1擦拭73
5.3.2加盖74
5.3.3灼烧74
5.3.4试剂瓶和培养瓶的操作74
5.3.5移液75
5.3.6液体倾倒75
5.4标准操作程序76
5.5仪器和设备82
5.5.1培养箱82
5.5.2盒装培养物82
5.5.3充入CO2气体82
第6章安全性、生物伦理及验证83
6.1实验室安全83
6.2危险性评估83
6.3标准操作程序85
6.4安全规则85
6.5常规安全86
6.5.1操作者87
6.5.2设备87
6.5.3玻璃器皿和锐利物品87
6.5.4化学毒性88
6.5.5气体89
6.5.6液氮89
6.5.7灼烧90
6.6火90
6.7放射性91
6.7.1摄入91
6.7.2放射性废弃物的处理91
6.7.3标记的试剂91
6.7.4高能源91
6.8生物危害性92
6.8.1生物防范水平92
6.8.2微生物学安全通风橱（MSC）94
6.8.3人体活检材料96
6.8.4遗传操作97
6.8.5生物危害性废弃物处理97
6.8.6熏蒸97
6.9生物伦理98
6.9.1动物组织98
6.9.2人体组织材料98
6.10质量保证99
6.10.1操作程序100
6.10.2质量控制（QC）100
6.11验证100
6.11.1鉴定100
6.11.2来源101
6.11.3污染101
第7章培养器皿和附着物102
7.1附着物102
7.1.1细胞的附着和生长102
7.1.2常见的附着材料102
7.1.3其他替代性附着物103
7.2表面处理103
7.2.1基质覆盖103
7.2.2饲养层105
7.2.3非黏附性附着面106
7.3培养器皿的选择107
7.3.1细胞产量107
7.3.2悬浮培养109
7.3.3通风110
7.3.4取样和分析111
7.3.5不均匀生长112
7.3.6价格112
7.4特殊系统112
7.4.1渗透性支持物112
7.4.2三维基质113
第8章成分明确培养基及补充物115
8.1培养基的发展史115
8.2物理化学特征115
8.2.1pH115
8.2.2CO2和碳酸盐116
8.2.3缓冲作用123
8.2.4氧气123
8.2.5渗透压124
8.2.6温度124
8.2.7黏滞度125
8.2.8表面张力和成泡性125
8.3平衡盐溶液126
8.4完全培养基126
8.4.1氨基酸127
8.4.2维生素127
8.4.3盐类127
8.4.4葡萄糖128
8.4.5有机补充物128
8.4.6激素和生长因子128
8.4.7抗生素128
8.5血清129
8.5.1蛋白质130
8.5.2生长因子131
8.5.3激素131
8.5.4营养物及代谢物132
8.5.5脂类132
8.5.6矿物质132
8.5.7抑制物132
8.6培养基和血清的选择132
8.6.1批次预约134
8.6.2血清的测试135
8.6.3热灭活135
8.7其他添加物136
8.7.1氨基酸水解物136
8.7.2胚胎浸出液136
8.7.3适应性培养基136
第9章无血清培养基137
9.1血清的缺点145
9.2无血清培养基的优点146
9.2.1标准培养基的定义146
9.2.2选择性培养基146
9.2.3调节细胞增殖与分化146
9.3无血清培养基的缺点146
9.4血清的替代147
9.4.1无血清培养基的商业供应147
9.4.2血清替代物147
9.4.3无血清传代培养148
9.4.4激素149
9.4.5生长因子149
9.4.6血清中的营养物质154
9.4.7蛋白质和多聚胺154
9.4.8黏滞度154
9.5无血清培养基的选择154
9.5.1细胞或产物特异性154
9.5.2适应无血清培养基157
9.6无血清培养基的研发157
9.7无血清培养基的制备157
9.8无动物蛋白培养基158
9.9小结158
第10章准备与灭菌159
10.1准备试剂与用品159
10.2设备与液体的灭菌159
10.3设备162
10.3.1玻璃器皿162
10.3.2玻璃移液管165
10.3.3螺口盖168
10.3.4清洁剂的选择170
10.3.5种类繁杂的设备170
10.3.6可重复使用的灭菌过滤器171
10.4试剂与培养基173
10.4.1水173
10.4.2纯水器的维护175
10.4.3平衡盐溶液175
10.4.4培养基的配制与灭菌177
10.4.5干粉培养基180
10.4.6特制培养基182
10.5培养基的灭菌183
10.5.1可高压灭菌的培养基183
10.5.2除菌过滤183
10.5.3血清192
10.5.4其他试剂的准备与灭菌195
10.6培养基的质控、检测和储存196
10.6.1质量控制196
10.6.2无菌检测196
10.6.3培养物检测197
10.6.4储存197
第11章原代培养199
11.1原代培养入门199
11.1.1用于解离组织的酶199
11.1.2解离过程的共同特点200
11.2组织分离200
11.2.1小鼠胚胎200
11.2.2鸡胚204
11.2.3人体活检材料206
11.3原代培养的类型207
11.3.1原代外植207
11.3.2酶的解离作用210
11.3.3温胰蛋白酶消化210
11.3.4低温预处理的胰蛋白酶消化213
11.3.5鸡胚器官原基216
11.3.6其他酶解过程219
11.3.7胶原酶220
11.3.8机械法解离222
11.3.9分离活细胞224
11.3.10原代培养小结225
11.3.11原始记录225
第12章传代培养和细胞系227
12.1传代培养和扩增227
12.1.1交叉污染和鉴定错误229
12.1.2支原体污染231
12.1.3术语定义231
12.1.4细胞系的命名232
12.1.5培养物的年龄233
12.2选择细胞系233
12.3常规培养234
12.3.1细胞形态的意义234
12.3.2培养基的更换235
12.3.3标准的换液方案236
12.4传代238
12.4.1传代标准240
12.4.2单层生长细胞典型的传代方案241
12.4.3生长周期和传代比率243
12.4.4传代时的细胞浓度245
12.4.5悬浮培养细胞的扩增245
12.4.6悬浮生长细胞的传代246
12.4.7培养条件的标准化248
12.4.8抗生素的使用248
12.4.9培养记录249
第13章克隆培养及筛选251
13.1克隆培养251
13.2贴壁率的刺激255
13.2.1促进克隆生长的条件255
13.2.2条件培养基256
13.2.3饲养层细胞257
13.3悬浮克隆培养259
13.4细胞克隆的分离264
13.4.1单层贴壁细胞克隆的其他分离技术267
13.4.2悬浮细胞克隆268
13.5复制性培养269
13.6选择性抑制剂269
13.7遗传变异细胞的筛选270
13.8细胞与基质的相互作用272
13.8.1选择性黏附272
13.8.2选择性脱壁272
13.8.3基质性质273
13.8.4选择性饲养层273
13.8.5半固体培养基选择273
第14章细胞分离275
14.1细胞密度及等密度沉降法275
14.2细胞体积与沉降速率279
14.2.1单位重力沉降279
14.2.2离心淘洗分离技术279
14.3以抗体为基础的分离技术280
14.3.1免疫盘化法281
14.3.2免疫磁珠分选281
14.4荧光活化的细胞分选法284
14.5其他分离技术285
14.6初学者如何进行细胞分离实践286
第15章细胞鉴定287
15.1鉴定的需求287
15.2真实性验证287
15.3保存记录和身世288
15.4鉴定指标288
15.4.1种属鉴定289
15.4.2谱系或组织标记289
15.4.3独特标记物291
15.4.4转化291
15.5细胞形态学291
15.5.1显微镜使用295
15.5.2染色297
15.5.3细胞学检查所用培养器皿：单层
培养299
15.5.4悬浮细胞细胞学检查标本的制备299
15.5.5光学显微照相技术302
15.6共聚焦显微镜303
15.7染色体分析303
15.7.1染色体显带技术306
15.7.2染色体分析307
15.8DNA含量308
15.8.1DNA杂交308
15.8.2DNA指纹技术308
15.8.3DNA绘谱309
15.9RNA和蛋白质314
15.10酶活性314
15.10.1同工酶314
15.10.2利用Authentikit进行同工酶电泳315
15.11抗原标记318
15.11.1免疫染色320
15.11.2免疫分析321
15.12分化322
第16章分化323
16.1体内表型的表达323
16.1.1去分化323
16.1.2细胞谱系选择324
16.2分化阶段324
16.3增殖和分化324
16.4定向和细胞谱系325
16.5干细胞可塑性326
16.6分化标记物327
16.7诱导分化328
16.7.1细胞相互作用328
16.7.2全身性因子330
16.7.3细胞-基质相互作用333
16.7.4极性和细胞形状334
16.7.5氧张力334
16.8分化和恶性334
16.9应用334
第17章转化和永生化336
17.1在细胞系鉴定中的作用337
17.2什么是转化337
17.3遗传不稳定性和异质性338
17.3.1遗传不稳定性338
17.3.2染色体畸变339
17.4永生化339
17.4.1衰老的控制340
17.4.2病毒基因致永生化341
17.4.3人成纤维细胞的永生化342
17.4.4端粒酶诱导的永生化345
17.4.5淋巴细胞永生化350
17.4.6转基因鼠350
17.5生长控制异常350
17.5.1停泊不依赖性350
17.5.2接触抑制351
17.5.3血清依赖353
17.5.4癌基因354
17.6致瘤性354
17.6.1恶性化354
17.6.2肿瘤移植355
17.6.3侵袭力355
17.6.4血管发生356
17.6.5纤溶酶原活化因子359
第18章污染361
18.1污染的来源361
18.1.1操作者的技术363
18.1.2环境364
18.1.3层流通风橱的使用和维护364
18.1.4湿度恒温箱364
18.1.5冷藏库365
18.1.6无菌材料366
18.1.7引入的细胞系和活组织366
18.1.8隔离366
18.2微生物污染的种类366
18.3污染物的监控366
18.3.1可见的微生物污染367
18.3.2支原体368
18.3.3支原体的荧光染色369
18.3.4PCR法检测支原体370
18.3.5检测支原体的替代方法374
18.3.6支原体检测服务375
18.3.7病毒污染375
18.4污染培养物的处理375
18.5污染的去除376
18.5.1细菌、真菌和酵母菌376
18.5.2支原体的消除377
18.5.3清除病毒污染378
18.5.4顽固污染379
18.6交叉污染379
18.7结论380
第19章冻存381
19.1冻存的意义381
19.2冻存前注意事项381
19.2.1鉴定382
19.2.2何时冻存382
19.3冻存细则382
19.3.1细胞冻存的理论背景382
19.3.2细胞浓度382
19.3.3冻存液383
19.3.4冷却速度383
19.3.5安瓿386
19.3.6低温冰箱386
19.3.7培养细胞的冻存389
19.3.8 冻存记录391
19.3.9安瓿的解冻392
19.3.10培养瓶冻存394
19.4玻璃化保存394
19.4.1hES细胞的冻存394
19.4.2hES细胞解冻397
19.5冻存库的设计和监控398
19.5.1冻存管理399
19.5.2细胞库存的连续更换399
19.6细胞库400
19.7细胞的运输400
19.7.1冻存安瓿401
19.7.2活细胞401
第20章定量403
20.1细胞计数403
20.1.1血细胞计数器404
20.1.2电子计数407
20.1.3染色的单层细胞411
20.1.4流式细胞仪411
20.2细胞质量413
20.3DNA含量413
20.4蛋白质414
20.4.1样品的溶解性414
20.4.2Bradford分析414
20.5合成速率415
20.5.1DNA合成415
20.5.2蛋白质合成417
20.6准备样品用于酶分析和免疫分析418
20.7细胞计数419
20.7.1原位标记419
20.7.2流式细胞术419
20.8重复取样419
20.8.1数据获得419
20.8.2数据分析420
20.9细胞增殖420
20.9.1实验设计421
20.9.2生长周期421
20.9.3单层细胞生长曲线的分析425
20.9.4培养基体积，细胞浓度和细胞密度427
20.9.5悬浮培养428
20.9.6生长周期的各个阶段429
20.9.7生长曲线的衍生物430
20.10贴壁效率431
20.10.1集落形成分析433
20.10.2自动集落计数434
20.11标记指数434
20.11.1生长分数437
20.11.2有丝分裂指数438
20.11.3分裂指数438
20.12细胞周期时间438
20.13细胞迁移438
第21章细胞毒性439
21.1活性、毒性和存活439
21.2体外局限性440
21.2.1药物代谢动力学440
21.2.2新陈代谢440
21.2.3组织和全身反应440
21.3分析的性质440
21.3.1生存力441
21.3.2存活443
21.3.3细胞增殖测定448
21.3.4代谢性细胞毒性测定448
21.3.5微滴定实验449
21.3.6微滴定与克隆存活的比较453
21.3.7药物的相互作用454
21.4细胞毒性实验的应用454
21.4.1抗癌药物筛选454
21.4.2肿瘤药物的前瞻性实验454
21.4.3药物学实验455
21.5基因毒性455
21.5.1姐妹染色单体交换的诱变实验455
21.5.2致癌性458
21.6炎症反应459
第22章特殊类型细胞的培养461
22.1特殊细胞培养技术463
22.2上皮细胞463
22.2.1表皮464
22.2.2角膜469
22.2.3乳腺471
22.2.4子宫颈473
22.2.5胃肠道476
22.2.6肝478
22.2.7原代肝细胞培养478
22.2.8人肝癌细胞系HepaRG481
22.2.9胰483
22.2.10肾485
22.2.11气管和支气管上皮487
22.2.12口腔上皮489
22.2.13前列腺490
22.3间充质细胞492
22.3.1结缔组织493
22.3.2脂肪组织493
22.3.3肌495
22.3.4软骨501
22.3.5骨504
22.3.6内皮细胞506
22.4神经外胚层细胞512
22.4.1神经细胞512
22.4.2神经胶质细胞513
22.4.3内分泌细胞519
22.4.4黑素细胞520
22.5造血细胞523
22.6生殖腺524
22.6.1卵巢524
22.6.2睾丸524
第23章干细胞、生殖细胞和羊水细胞525
23.1干细胞525
23.1.1胚胎干细胞525
23.1.2小鼠胚胎干细胞的诱导525
23.1.3小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增530
23.1.4人胚胎干细胞的原代培养532
23.1.5hES细胞的传代534
23.1.6鱼胚胎来源的多能干细胞535
23.2生殖细胞539
23.3胚外细胞540
23.3.1羊水细胞的培养540
23.3.2从新生儿或青年来源的细胞544
23.3.3成人来源的多能干细胞544
23.3.4人骨髓来源间充质干细胞545
23.3.5诱导多潜能干细胞548
23.3.6小鼠骨髓长期培养552
23.3.7人原始造血细胞长期培养554
23.3.8造血细胞集落形成分析559
第24章肿瘤细胞培养562
24.1肿瘤细胞培养中的问题562
24.2取材563
24.2.1代表性细胞的选择563
24.2.2冷冻组织保存564
24.3分离564
24.4原代培养565
24.5肿瘤细胞的选择培养566
24.5.1选择培养基566
24.5.2汇合饲养层566
24.5.3悬浮克隆569
24.5.4异种移植569
24.6细胞系的建立570
24.6.1原代肿瘤培养物的传代570
24.6.2连续细胞系570
24.7肿瘤细胞培养物的特征571
24.7.1肿瘤细胞的异质性571
24.7.2组织型培养572
24.8特殊类型肿瘤572
24.8.1乳腺572
24.8.2肺574
24.8.3胃575
24.8.4结肠575
24.8.5胰腺578
24.8.6卵巢578
24.8.7前列腺578
24.8.8膀胱579
24.8.9皮肤579
24.8.10子宫颈580
24.8.11胶质细胞瘤580
24.8.12神经母细胞瘤581
24.8.13精原细胞瘤581
24.8.14淋巴瘤和白血病581
第25章三维培养583
25.1细胞的相互作用和表型表达583
25.1.1细胞密度的作用583
25.1.2相互作用584
25.1.3模型的选择584
25.2器官培养586
25.2.1气体和营养物质的交换586
25.2.2结构的完整性586
25.2.3生长与分化587
25.2.4器官培养的限制587
25.2.5器官培养的类型587
25.3组织型培养589
25.3.1凝胶和海绵技术589
25.3.2中空纤维590
25.3.3球体590
25.3.4转动室系统593
25.3.5藻酸盐活细胞固定术594
25.3.6滤膜培养皿594
25.3.7神经聚集物的培养597
25.4器官型培养599
25.4.1组织等同物599
25.4.2组织工程599
25.5三维构建物中细胞的成像601
第26章规模与自动化602
26.1悬浮规模培养602
26.1.1连续培养605
26.1.2规模和复杂性606
26.1.3搅匀和换气608
26.2单层规模培养610
26.2.1多表面扩增器610
26.2.2旋转培养613
26.2.3微载体615
26.2.4巨型微载体617
26.2.5灌流式单层培养619
26.3程序控制620
26.4自动化621
26.4.1机器人细胞培养621
26.4.2高产量检测622
第27章特殊技术624
27.1淋巴细胞的制备624
27.1.1隔离的密度624
27.1.2淋巴母细胞的转化625
27.2放射自显影术626
27.3间隔性记录632
27.4细胞同步化634
27.4.1细胞分离634
27.4.2阻断635
27.5冷血动物细胞的培养635
27.5.1鱼细胞636
27.5.2昆虫细胞636
27.6体细胞融合637
27.6.1细胞杂交637
27.6.2移核实验640
27.7单克隆抗体的制备640
第28章培训纲要646
28.1目的646
28.2实验制备及操作技巧647
28.3基本的细胞培养技术660
28.4高阶练习682
28.5特殊练习697
第29章问题与对策698
29.1细胞异常形态698
29.2细胞生长缓慢699
29.2.1仅限于自己细胞出了问题699
29.2.2其他人也遇到同样的问题699
29.3培养基700
29.3.1试剂配方、准备和存储700
29.3.2不稳定试剂701
29.3.3配制培养基各种成分的纯度702
29.4基质和容器703
29.5微生物污染703
29.5.1仅限于单个实验者的问题704
29.5.2普遍问题705
29.5.3室内供气和层流净化工作台706
29.5.4特定污染706
29.6化学污染707
29.6.1玻璃器皿707
29.6.2移液管707
29.6.3水的纯化707
29.6.4低温冻存707
29.6.5粉末或气溶胶708
29.7原代培养708
29.7.1原代培养的存活率低708
29.7.2选择细胞错误709
29.7.3污染709
29.8分化710
29.9饲养层710
29.9.1常规单层培养710
29.9.2克隆培养710
29.10传代711
29.10.1收获率低或生长缓慢711
29.10.2生长不均匀711
29.11克隆712
29.11.1培养皿形成的克隆数过低712
29.11.2培养皿形成的克隆数太多713
29.11.3非随机分布713
29.12交叉污染和错误标记713
29.13冻存714
29.13.1复苏时存活率低714
29.13.2冻存后细胞形态发生变化714
29.13.3冻存细胞丢失715
29.14细胞计数715
29.14.1血细胞计数板715
29.14.2使用电阻抗法电子计数仪715
第30章结语717
附录Ⅰ计算配制及试剂制备719
附录II设备及材料来源733
附录III供应商和其他资源763
附录IV术语779
附录V交叉污染或鉴定有误的细胞系789
附录VI一般教材与相关期刊809
参考文献811
索引883
提取码游客，本帖隐藏的内容需要积分高于 70 才可浏览，您当前积分为 0 | 
请点击此处下载
收藏
